李芳芳,杨少宗,柳新红,李海波,王丽玲,李永华

• 1:河南农业大学
• 2:浙江省林业科学研究院

摘要(Abstract)：

通过不同处理的枫香树叶片及基因组DNA提取方法的对比,并采用L16(45)正交试验设计,对影响SRAP-PCR反应体系的Mg2+,d NTPs,引物浓度及Taq DNA聚合酶和模板DNA用量等5个因素进行优化,确立枫香树SRAP-PCR最佳反应体系。结果表明,改良CTAB法提取枫香树基因组DNA的产率和纯度均可满足下游试验需要。SRAP-PCR最优反应体系为:总体积20μL,含1×PCR Buffer,1.5 mmol·L-1Mg2+,0.16mmol·L-1d NTPs,0.5μmol·L-1引物,0.9 U Taq DNA聚合酶和40 ng模板DNA。各因素对反应结果的影响大小顺序为Taq DNA聚合酶量>d NTPs浓度>Mg2+浓度>模板DNA用量>引物浓度。运用优化的SRAPPCR反应体系对10个不同居群的枫香树基因组DNA扩增检测,结果均能获得稳定性高、多态性丰富和重复性好的条带图谱。

关键词(KeyWords)： 枫香树;DNA提取;SRAP-PCR;正交试验设计;反应体系优化

Abstract:

Keywords:

基金项目(Foundation): 林业公益性行业科研项目(201404312);; 浙江省重大科技项目(2012C12908-14);浙江省重大科技项目(2012C12909-21)

作者(Author): 李芳芳,杨少宗,柳新红,李海波,王丽玲,李永华

DOI: 10.16445/j.cnki.1000-2340.2015.01.009

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