杨雪,雒军,杨彩霞,王振恒,夏琦,王引权

• 1:甘肃中医药大学药学院
• 2:甘肃中医药大学科研实验中心

摘要(Abstract)：

通过同源比对查找GAPDH基因的保守区,运用逆转录PCR、同源克隆及cDNA末端快速克隆(rapid-amplification of cDNA ends,RACE)等技术从当归中克隆GAPDH基因的全长cDNA序列,利用生物信息学分析工具对该基因编码蛋白的基本性质、结构特点及生物学功能进行初步预测,采用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)分析当归GAPDH基因的表达稳定性。结果表明,克隆得到当归GAPDH基因cDNA全长序列为1 345个核苷酸,开放阅读框(open reading frame,ORF)为1 005 bp,3’UTR和5’UTR长度分别为268 bp和72 bp,共编码334个氨基酸,该基因命名为AsGAPDH。AsGAPDH基因编码蛋白的预测相对分子质量为36.3 kD,理论等电点为7.06,为亲水性非分泌型蛋白,与伞形科植物白芹的亲缘关系最近。AsGAPDH基因在当归根、叶柄及叶中的表达量相近且稳定性好,扩增特异性强。

关键词(KeyWords)： 当归;GAPDH基因;克隆;序列分析;实时荧光定量PCR

Abstract:

Keywords:

基金项目(Foundation): 国家重点研发计划专项“中药材生态种植技术研究及应用”项目(2017YFC1700705);; 国家自然科学基金项目(81660625);; 甘肃省高校协同创新科技团队支持计划(2016C-05FF09)

作者(Author): 杨雪,雒军,杨彩霞,王振恒,夏琦,王引权

DOI: 10.16445/j.cnki.1000-2340.2018.06.014

参考文献(References)：

• [1]马红娜,周飘苹,陆游,等.不同脂肪和葡萄糖水平对大黄鱼生长性能、肝脏糖酵解和糖异生关键酶活性的影响[J].动物营养学报,2016,28(10):3110-3122.
• [2]郭瑞,周际,杨帆,等.小麦根系在碱胁迫下的生理代谢反应[J].植物生态学报,2017,41(6):683-692.
• [3]岳远征,李娅,罗雪琪,等.盐胁迫对海州常山幼苗生长及生理特性的影响[J].河南农业大学学报,2018,52(1):38-42.
• [4]孙蓉,高静雷,刘姗,等.金龙胆草3-磷酸甘油醛脱氢酶基因的克隆及序列分析[J].中草药,2013,44(19):2732-2735.
• [5]张磊,刘志鹏,张吉宇,等.箭筈豌豆甘油醛-3-磷酸脱氢酶基因片段的克隆及序列分析[J].草业科学,2011,28(5):753-757.
• [6]王晓林,吉姣姣,高建平.党参Cp GAPDH基因的克隆及表达分析[J].中国中药杂志,2018,43(04):712-720.
• [7]国家药典委员会.中华人民共和国药典[S].一部.北京:中国医药科技出版社,2015:133-134.
• [8]严辉,段金廒,尚尔鑫,等.当归不同部位入药功效取向差异的化学物质基础与药性关联性研究[J].中草药,2014,45(21):3208-3212.
• [9]薛蓓,张培,李志辉,等.脊尾白虾GAPDH基因的克隆及其内参基因稳定性分析[J].中国水产科学,2017,24(5):1003-1012.
• [10]张国付,蒋素华,崔波,等.文心兰GAPDH基因片段的克隆及序列分析[J].河南农业大学学报,2013,47(1):68-71.
• [11]张旸,郭海俊,刘龙飚,等.星星草Pt GAPDH基因的克隆与表达分析[J].草业学报,2014,23(2):207-214.
• [12]张霞,王艳,张富春.逆境胁迫下甘油醛-3-磷酸脱氢酶功能多元化的研究进展[J].植物生理学报,2013,49(1):24-28.
• [13]张霞,张桦,张富春.盐胁迫下盐穗木甘油醛-3-磷酸脱氢酶基因的表达与亚细胞定位分析[J].西北植物学报,2015,35(7):1283-1288.
• [14]孙伟,管悦,周峰,等.木榄甘油醛-3-磷酸脱氢酶全长c DNA的克隆及其序列分析[J].药物生物技术,2010,17(1):21-26.
• [15]张梅娟,沙伟,刘博,等.东亚砂藓甘油醛-3-磷酸脱氢酶基因的克隆及表达分析[J].安徽农业科学,2014,42(25):8506-8510.
• [16]陈鸿鹏,朱凤云,吴志华,等.赤桉GAPDH家族基因的克隆及其序列分析[J].林业科学研究,2014,27(1):120-127.
• [17]温随超,雒军,王引权,等.适宜当归实时荧光定量分析的总RNA提取方法研究[J].中国农学通报,2014,30(21):235-239.
• [18]卢倩,弭晓菊,崔继哲.植物甘油醛-3-磷酸脱氢酶作用机制的研究进展[J].生物技术通报,2013(8):1-6.
• [19]贾岩龙,牛杰,贾俊英,等.杜氏盐藻GAPDH c DNA的克隆鉴定及其启动子功能表达载体的构建[J].生物技术通报,2011(7):106-110.
• [20]余汇,蒋向军,覃宇燕,等.罗汉果GAPDH基因的克隆及其在基因表达分析中的应用[J].时珍国医国药,2014,25(2):495-498.
• [21]龙登凯,丁铃,李军,等.太子参GAPDH基因的克隆及序列分析[J].河南农业科学,2016,45(7):87-92.
• [22]邢朝斌,吴鹏,陈龙,等.刺五加GAPDH基因的克隆及序列分析[J].中草药,2012,43(1):155-158.