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【目的】构建高质量的假禾谷镰孢cDNA酵母双杂交文库，获得假禾谷镰孢中与FpgBTB1直接互作的蛋白质。【方法】以假禾谷镰孢WZ-8A菌株的菌丝体为材料，提取其总RNA，采用Gateway技术构建cDNA初级文库，将初级文库质粒与pGADT7-DEST载体通过LR重组反应连接，获得核系统次级文库；采用同源重组法构建基因FpgBTB1的诱饵重组载体，通过酵母双杂交共转法筛选其互作蛋白，并做一对一互作验证。【结果】构建的初级文库库容量为1.20×107 CFU、次级文库容量为1.40×107 CFU，插入片段大小均为750～2 000 bp，重组率均达到100%；成功构建了pGBKT7-FpgBTB1诱饵重组载体，经筛库获得6个候选互作蛋白，一对一验证结果表明果糖-1，6-二磷酸醛缩酶(XP＿009261710.1)、微管蛋白α链(XP＿009257790.1)、超氧化物歧化酶(XP＿009261302.1)、含核酸内切酶/核酸外切酶/磷酸酶结构域的蛋白(XP＿009256684.1)与FpgBTB1蛋白存在互作。【结论】获得了高质量的假禾谷镰孢cDNA文库，并利用该文库成功鉴定到4个与FpgBTB1互作的蛋白质，为揭示FpgBTB1在假禾谷镰孢中的功能奠定了基础。
Abstract：【Objective】 To construct a high-quality cDNA yeast two-hybrid (Y2H) library of Fusarium pseudograminearum to obtain proteins that directly interact with FpgBTB1 in F. pseudograminearum. 【Method】 The mycelium of F. pseudograminearum strain WZ-8A was used as the material， from which the total RNA was extracted. Gateway technology was used in the construction of the primary library and the primary library plasmid was connected with the pGADT7-DEST vector through LR recombination reaction to obtain the secondary library of the nuclear system. The bait recombination vector of FpgBTB1 was constructed by homologous recombination， and Y2H co-transformation was used to screen its interacting proteins， followed by one-to-one interaction verification. 【Result】 The capacity of the primary library was 1.20×107 CFU， and the capacity of the secondary library was 1.40×107 CFU， and the size of the inserts was between 750 bp and 2 000 bp， and the recombination rate reached 100%. The recombinant bait vector pGBKT7-FpgBTB1 was successfully constructed， and six candidate interacting proteins were obtained through the Y2H library. One-on-one verification results showed that fructose-1，6-bisphosphate aldolase (XP＿009261710.1)， tubulin alpha chain (XP＿009257790.1)， superoxide dismutase (XP＿009261302.1)， and a protein containing endonuclease/exonuclease/phosphatase domains (XP＿009256684.1) interact with FpgBTB1 protein. 【Conclusion】 A high-quality cDNA library of F. pseudograminearum was constructed， and four proteins interacting with FpgBTB1 were successfully identified， which laid a foundation for revealing the function of FpgBTB1 in F. pseudograminearum.
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基本信息:
DOI：10.16445/j.cnki.1000-2340.20260522.002
中图分类号:S435.121
引用信息:
[1]韩鑫涛,谢源,尚千奇,等.假禾谷镰孢酵母双杂交文库构建及FpgBTB1互作蛋白筛选[J].河南农业大学学报().DOI:10.16445/j.cnki.1000-2340.20260522.002.
基金信息:
河南省重点研发专项(251111114100); 河南农业大学校级研究生教改项目(NDYJSJG2021-11)
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